Determinacion de aflatoxinas pdf

Desinfectar los vegetales que vayan a consumirse crudos o bien lavarlos con abundante agua. Listeria monocytogenes Campylobacter jejuni Staphylococcus aureus. Shigella Yersinia enterocoltica Fuentes de contaminacin:. Alimentos refrigerados se multiplica de forma rpida durante el almacenamiento de los alimentos a unas temperaturas de refrigeracin. Las aflatoxinas son absorbidas en el tracto gastrointestinal debido a su alta liposolubilidad, son biotransformadas en el hgado por enzimas microsomales de la superfamilia del citocromo P entre las que se encuentran CYP1A2, 3A4, 3A5 y 3A7.

Las dos enzimas ms importantes son representadas por la CYP3A4 que interviene en la formacin de la forma exo-epxido y el metabolito AFQ1. Aproximadamente el 80 por ciento de la dosis total de AFB1 se excreta en una semana. Su accin carcinognica se basa en la biotransformacin por el sistema heptico microsomal P a AFB,9-epxido, un metabolito altamente reactivo capaz de unirse a las protenas, al ADN y al ARN; formando un compuesto estable con el N7 de los residuos guanil que puede causar mutaciones en el codn del gen p53 supresor de tumores.

Esta alteracin es caracterstica de varios carcinomas, especialmente del carcinoma heptico en el hombre. AFB,9-epxido forma uniones covalentes con los residuos de guanina del ADN, que se excretan por va urinaria y pueden utilizarse como biomarcadores de exposicin en los grupos con riesgo de cncer de hgado. Daos biolgicos Estas micotoxinas se producen y consumen con alimentos contaminados, se acumulan por aos en el ADN, causan efectos dainos como mutaciones, malformaciones en fetos, abortos y cnceres diversos de hgado, pncreas, colorectal, de pulmn, o cervicouterino.

Sus efectos agudos en humanos se manifiestan por la ingestin en altas concentraciones miligramos en poco tiempo minutos a horas. Causan vmitos, abortos y diarrea; tienen efectos crnicos si se toman en cantidades bajas microgramos durante aos; provocan malformaciones en fetos, cncer, inmunodepresin, entre otros padecimientos, hasta ocasionar la muerte. Biotransformacin Despus de la formacin de la AFB1-epxido pueden formase dihidrodioles 8,9-dihidro-8,9-dihidroxi-aflatoxina B1 metabolitos de la AFB1 que se unen a protenas celulares mediante la formacin de bases de Schiff induciendo dao celular y eventualmente muerte celular; es importante resaltar que la AFB1-epxido puede tambin formar aductos con los residuos de lisina de la albmina y otras protenas celulares.

Cerca del 5 por ciento de la dosis ingerida de AFB1 se une a la albmina. La aflatoxina B1 se metaboliza, principalmente, por el sistema microsomal de oxidasas de funcin mixta MFO , que es una organizacin compleja de enzimas de las clulas hepticas NADPH dependientes, unidas al citocromo P Su principal caracterstica es la capacidad de unirse a las macromolculas protenas, ADN y ARN formando aductos figura 5.

Sin embargo, uno de sus efectos txicos ms importantes es el relativo a su interaccin con el cido desoxirribonucleico ADN , por los efectos mutagnicos y carcinognicos que esta implica. Sintomatologa de aflatoxinas Cunto le afectarn a una persona las micotoxinas aflatoxinas depende de cosas como la edad de la persona, el sexo, el nivel de exposicin, la duracin de la exposicin, la salud, la fortaleza de su sistema inmunolgico, la dieta y factores ambientales.

La primera es cuando alguien toma una cantidad elevada de aflatoxinas en un periodo de tiempo muy corto. Esto puede causar:. La otra forma en que las personas pueden sufrir un envenenamiento por aflatoxinas es por tomar pequeas cantidades de aflatoxinas pero durante un largo perodo de tiempo. Anlisis toxicolgico Deteccin de aflatoxina en humanos Hay dos tcnicas para detectar niveles de aflatoxina en humanos.

La presencia de este producto de la metabolizacin indica exposicin a aflatoxina en las 24 h anteriores. Sin embargo, esta tcnica tiene un error significativo en dar resultado positivo en solo un tercio de los positivos. Adicionalmente, debido a la vida media de ese metabolito, el nivel de guanina AFM1 medido puede variar significativamente de da a da, dependiendo de la dieta, y no es til para documentar exposicin de largo trmino. Adems es til para medir exposiciones crnicas, ya que mantiene la positivacin por dos a tres meses.

Para este mtodo solamente necesitaremos de la cmara de luz ultravioleta. La marcha que se realizar para llevar a cabo el proyecto mencionado, es la siguiente: Tipos de muestras: Granos: especficamente maz, arroz y frijoles.

Agregar 25 ml de tolueno o cloroformo. Disolver el residuo en l de tolueno:acetonitrilo , agitar para disolver y con jeringa de 10 l. Sembrar en placa de slica gel. El cronograma se desarrolla utilizando como fase mvil la mezcla cloroformo acetona sin equilibrar. El revelado se realiza bajo luz ultravioleta de onda larga. Interpretacin Deben analizarse las manchas Examinar la fluorescencia y comparar sus respectivos valores de Rf con los de los estndares patrn.

El xito en la determinacin de un residual en los alimentos, o en materiales biolgicos, se debe a un conjunto de procedimientos que hacen posible una determinacin ms precisa y exacta independientemente del mtodo analtico. Entre las etapas a considerar para llevar a cabo la deteccin de aflatoxinas en los alimentos estn: muestreo, extraccin, purificacin o limpieza y deteccin.

Hay que tener en cuenta que si se evalan las toxinas en productos alimenticios, se debe buscar las B y G principalmente, mientras que si se evalan aflatoxinas en animales o humanos, la toxina que ms comnmente se selecciona es la M, que es un subproducto de biotransformacin de la toxina B1, que se puede encontrar en leche, sangre y orina.

El muestreo implica una seleccin de una muestra representativa de un lote la cantidad de producto o granos entregados o recibidos, en un determinado momento que tiene propiedades comunes o caractersticas uniformes que posibilita un anlisis ms preciso de la sustancia objeto de estudio.

La distribucin de micotoxinas en los productos tiene un carcter discreto o heterogneo, y es posible que solo un pequeo porcentaje de partculas de un lote est contaminado con niveles extremadamente altos de toxina Para disminuir los errores durante la preparacin de la muestra se han desarrollado muestreadores que operan continuamente durante la pulverizacin y homogeneizacin, lo que permite un proceso ms eficiente, esos son: el mezclador separador cortante vertical Hobbart y los molinos Dickens-Satterwhite y Rommer.

El proceso de extraccin tiene que ser eficiente, cuantitativo, no debe modificar la estructura de la sustancia y debe mantener sus propiedades biolgicas No existe un mtodo de aplicacin general a la extraccin de aflatoxinas, ya que este vara en dependencia del producto.

La purificacin previa de las toxinas en el extracto del material analizado es necesaria cuando se emplean procedimientos fsico-qumicos en la deteccin, pero cuando se utilizan procedimientos inmunolgicos, el paso de purificacin se omite analizndose solamente el extracto diluido Mientras ms pasos se usen para la purificacin, ser menor el recobrado de las toxinas.

La eficiencia en el recobrado de la toxina durante la purificacin de la muestra aumenta con el empleo de columnas preempacadas, debido a que se eliminan pasos de la purificacin como son: la rotoevaporacin, particin con otros solventes para lograr una extraccin selectiva y el empleo de grandes volmenes de solventes, que dificultan su manipulacin. Los mtodos de deteccin pueden dividirse en biolgicos y fsico. La cromatografa en capa delgada CCD es la tcnica ms utilizada en el anlisis de aflatoxinas y otras micotoxinas.

El xito de su aplicacin depende del tipo de adsorbente, del sistema de solventes y del mtodo de deteccin. Los adsorbentes ms comunes son: la slica gel G60 y la slica gel F , que pueden estar sobre soporte de cristal, plstico o metal 5x20 cm, 10x20 cm 20x20 cm con un grosor que vara desde 0,1 hasta 1mm. Para las aflatoxinas, el soporte ms usado es el de slica gel G 60 y los solventes ms utilizados son: cloroformo, metanol, benceno, acetona y ter etlico, preparados en diferentes proporciones.

El sistema de deteccin de las aflatoxinas se basa en la fluorescencia que ellas emiten, aunque su confirmacin se realiza por su reaccin con una sustancia qumica. La sensibilidad, exactitud y resolucin del anlisis de aflatoxinas por cromatografa de capa delgada se vieron mejoradas con la introduccin de la cromatografa de capa delgada de alta resolucin HPTLC , donde el soporte de los platos empleados pueden ser de fase normal slica o de fase reversa.

La determinacin de aflatoxinas en alimentos por el mtodo de minicolumnas conlleva menos gasto de reactivos y tiempo que la CCD. Para esto se utilizan tubos de cristal de 6 mm de dimetro y mm de largo que se llenan con almina, florisil y sulfato de sodio. Las aflatoxinas se detectan por la aparicin de una banda fluorescente entre las capas de almina y florisil que ser mayor con mayores concentraciones de aflatoxina 4.

La cromatografa lquida de alta resolucin o alta presin CLAR constituye otro de los mtodos de determinacin de aflatoxinas en diferentes medios. Esta tcnica presenta una serie de ventajas con respecto a la cromatografa de placa y minicolumnas, ellas son: aumento de la sensibilidad, exactitud, precisin y resolucin, adems que el sistema puede ser automatizado muy fcilmente.

El xito de este mtodo radica en el tipo de columna, detector y sistema de solventes que se utilicen. En la determinacin de aflatoxinas se utilizan las columnas de slica gel y de fase reversa y entre los detectores, los ms.

Los detectores de fluorescencia tienen mayor sensibilidad, y puede ser mejorada por el uso de una celda empaquetada con slica gel y la incorporacin de cido frmico a la fase mvil que evita el "quenching" en la fluorescencia de las aflatoxinas B1 y B2 La derivacin de la toxina con iodo o bromo, despus de la separacin por columna o el empleo de una precolumna de derivatizacin, tambin incrementan la fluorescencia de las aflatoxinas.

Una de las desventajas de la CLAR es que requiere de una purificacin previa de la muestra, lo que encarece la determinacin. La alta polaridad, baja volatilidad e inestabilidad trmica de las molculas de aflatoxinas ha limitado el uso de la cromatografa gaseosa para la determinacin de estas sustancias. Sin embargo, el empleo de columnas capilares de slica fundida y el uso de detectores de espectrmetros de masa ha permitido detectar aflatoxina B1 en maz y mantequilla de man por este mtodo.

Con el empleo de detectores de ionizacin de llama con columnas capilares de slica fundida de diferentes tamaos, se han podido separar las cuatro aflatoxinas naturales B1, B2, G1 y G2 , sin embargo, cuando se emplearon columnas mayores la sensibilidad para las aflatoxinas del tipo G fue menor que para las del tipo B.

Transformacin de un compuesto qumico en uno de estructura qumica similar, pero con propiedades qumicas diferentes. Cromatografa de capa delgada. La cromatografa en capa delgada CCD es la tcnica ms utilizada en el anlisis de aflatoxinas yotras micotoxinas.

El xito de su aplicacin depende del tipo de adsorbente, del sistema desolventes y del mtodo de deteccin. Los adsorbentes ms comunes son: la slica gel G60 y laslica gel F , que pueden estar sobre soporte de cristal, plstico o metal 5x20 cm, 10x20 cm 20x20 cm con un grosor que vara desde 0,1 hasta 1mm.

Para las aflatoxinas, el soporte ms usado es el de slica gel G 60 Miguel y de Andrs, ylos solventes ms utilizados son: cloroformo, metanol, benceno, acetona y ter etlico, preparadosen diferentes proporciones.

En la tabla 16 se muestran algunos de los sistemas de solventes y losRf de las. El sistema de deteccin de las aflatoxinas se basa en la29fluorescencia que ellas emiten, aunque su confirmacin se realiza por su reaccin con unasustancia qumica Nesheim y Brumley, La sensibilidad, exactitud y resolucin del anlisisde aflatoxinas por cromatografa de capa delgada se vieron mejoradas con la introduccin de lacromatografa de capa delgada de alta resolucin HPTLC Bradburn et al, , b , dondeel soporte de los platos empleados pueden ser de fase normal slica o de fase reversa Abramsonet al, Solventes empleados en cromatografa de capa delgada y valores de Rf para lasprincipales aflatoxinas.

Los valores numricos corresponden a los Rf x Isaaq y Cutchin En un estudio comparativo de diferentes mtodos, Bradburn et al a encontraron que elprocedimiento de HPTLC bidimensional con una fase estacionaria modificada fenil present losmejores recobrados de aflatoxinas, con respecto a las tcnicas de CB, BF y Rommer. Un procedimiento que combina las ventajas del HPTLC y la cromatografa lquida HPLC fuedesarrollado para aumentar la resolucin entre las muestras y el nmero de muestras a analizar.

Este mtodo se fundamenta en el desarrollo de una cromatoplaca en forma horizontal sometida auna sobrepresin y se conoce en ingls como OPLC OverpressureLayerChromatography. Enun estudio donde se compararon diferentes procedimientos cromatogrficos se encontr que laresolucin.

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Palabras clave: Aflatoxinas, Agar Coconut Oxitetraciclina, Elisa, Hace mucho se ha observado que la presencia de hongos puede ocasionar cambios en textura, color, sabor y calidad de los alimentos.

Estos se elaboran y se expenden sin el control sanitario que requieren estos productos; siendo la presencia de aflatoxinas un riesgo para su salud. Pipetas de 25 mL, 10 mL y 1 rnL. El tomadas al azar entre los diferentes recuento de hongos aflatoxigenicos se establecimientos de venta de productos realizo en las placas con CAMO, naturales del centro de Lima.

Posteriormente se aflatoxinas. CAMO mas los tres inductores. Numerosas su interior. En unas celdillas se Tctrametilbcnzidina. Secar la parte inferior de las celdillas y leer en el fotocolorimetro Los reactivos de deben de mantener a. Posteriormente, se los recuentos de hongos por lo tanto, se detenn. Flavus y A. Lida 10' 63,5 28 Hercamnuri "Los Ficus" 4x10' El ion sn, extracto de levadura y sacarosa promedio total fue 11,60 ppb, la menor se mas grande la fluorescencia.

El Agar Czapeck extracto de levadura es un magnifico medio de a. En el recuento de hongos que van a ser consumidos. Tech Fash. Graw page: Hill. Penicillum and Aspergillus Ajlatoxins. Neogen Identification. North Ryde.